由MNNG(亚硝基胍)引起的诱变损伤的本质以及它从DNA上被修复的机制可以用下面的实验来鉴定。为了确定诱变损伤的本质,未经处理的细菌和已用低剂量MNNG处理的细菌都在含50μg/ml的3H-MNNG的培养物中培养10min。分离它们的DNA并水解成核苷酸,然后经过纸层析分析放射性的嘌呤,结果如图Q12.2所示:
图Q12.2 层析法分离未被处理和已被低剂量MNNG处理的细菌DNA中被标记的甲基化嘌呤实线表示未被处理细菌DNA中的甲基化嘌呤;虚线表示MNNG处理的细菌所得结果
为了研究诱变损伤切除的机制,首先纯化负责切除的酶,把不同量的酶(相对分子质量19000)和已被3H标记含0.26pmol突变碱基的DNA一起温育,分析切除动力学。在不同时间取样,分析DNA以确定还存在多少突变残基(图Q12.3)。当在5℃而不是37℃时重复这个实验时,虽然最初的切除速率较慢,却得到一样的终点。
图Q12.3纯化的甲基转移酶把3H标记的甲基从DNA上切除所示为纯化酶的量
A.5’-3’聚合酶的活性
B.在细菌中5’-3’外切酶活性是必要的
C.外切酶活性,可以降解RNA/DNA杂交体中的RNA引物
D.修复酶的功能
E.3’-5’外切酶的活性
A.该病为一种癌前病变
B.患者先天性缺乏修复DNA所需的酶
C.患者机体细胞的DNA较常人更易损伤
D.患者有多个肿瘤癌基因的激活
E.患者有多个肿瘤抑制基因的失活
A.碱基与特殊染料间不同的相互作用
B.一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
C.限制性位点与DNA末端标记的相关性
D.可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
E.反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤,也节约了开支