如何经行脾细胞与瘤细胞杂交及杂交后的筛选？

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第1题

c-fos基因是FBJ鼠骨肉瘤病毒所携带的癌基因的细胞内同源基因。它的功能未知，c-fos的激活是对于生长因子的最

早的转录反应之一。在小鼠细胞中，c-fos的转录水平在5min内显著增加，在10～15min时达最大值之后突然下降。为了研究人类c-fos基因的瞬时诱导的机制，可以克隆一个DNA片段，它含有全长的转录单元，这个转录单元起始于转录起始点上游-750bp处，终止于+1.5kb的poly(A)加入位点(图13-3-60(1)A)。当把这个克隆转至小鼠细胞中时(我们可以较为容易区分克隆与内源性c-fos基因的mRNA)，一天后加入血清(富含生长因子)刺激细胞生长。你发现同样的瞬时诱导(图13-3-60(2)A)。尽管与小鼠基因相比，时间上有略微的延长。

通过分析一个类似增强子元件(SRE血清反应元件)的一系列缺失突变体，发现在转录起始点上游的300核苷酸序列对于在加入血清后增强转录是必需的。通过建立包含有人β-球蛋白部分基因(它编码一个极为稳定的mRNA)的各种杂交基因来研究c-fos mRNA的稳定性。球蛋白基因的结构和两种杂交基因如图13-3-60(1)B、C、D所示。在低血清浓度下，当杂交基因转染鼠细胞时，24小时后它才对血清作出反应(图13-3-60(2)B、C所示)。

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第2题

mRNA往往是用各种杂交技术检测的，也就是通过mRNA与单链DNA一起保温，形成DNA－RNA杂交物。有一种技术，把单链DN

mRNA往往是用各种杂交技术检测的，也就是通过mRNA与单链DNA一起保温，形成DNA-RNA杂交物。有一种技术，把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上，加上放射性标记的RNA，然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上，所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中，从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA，然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示，其中的数字表示离DNA左侧的距离，相对距离范围为0～100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验，吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase，该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA)；另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录？